體外蛋白表達(dá)有這些特點(diǎn)值得你知道
更新時(shí)間：2021-09-09 點(diǎn)擊次數(shù)：1703
蛋白表達(dá)就是重組DNA的一種實(shí)現(xiàn)技術(shù)，是用人為的方法將某一供體生物的遺傳物質(zhì)-DNA大分子提取出來(lái)，之后在離體的條件下用適當(dāng)?shù)墓ぞ呙高M(jìn)行切割，再把它與載體的DNA分子連接起來(lái)，然后一起導(dǎo)入受體細(xì)胞中，從而使得外源物質(zhì)在其中“安家落戶”，進(jìn)行正常的復(fù)制和表達(dá)。利用重組蛋白表達(dá)技術(shù)，對(duì)蛋白質(zhì)功能結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究，給人類生產(chǎn)、生活帶來(lái)了極大的影響，在各個(gè)領(lǐng)域發(fā)揮了重要的作用。
體外蛋白表達(dá)在大腸桿菌蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)常會(huì)遇到蛋白表達(dá)不出來(lái)、表達(dá)出的蛋白沒(méi)有活性、蛋白表達(dá)過(guò)程中容易形成包涵體等情況，還要分析出現(xiàn)這些情況的原因： 1、目的蛋白不適合在大腸桿菌中表達(dá)。包括稀有密碼子、mRNA結(jié)構(gòu)、跨膜區(qū)等；
2、表達(dá)條件需要進(jìn)一步優(yōu)化。比如溫度、分子伴侶、適合的表達(dá)宿主等；
3、采用哪種溫和復(fù)性條件可以提高蛋白活性，減少包涵體的形成等等。
體外蛋白表達(dá)系統(tǒng)的特點(diǎn)：
是一種簡(jiǎn)單快速的蛋白質(zhì)體外表達(dá)系統(tǒng)。基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯基于大腸桿菌的內(nèi)源TXTL機(jī)制，在體外建立高效的無(wú)細(xì)胞反應(yīng)體系。同時(shí)，又保證了表達(dá)系統(tǒng)的兼容性。
表達(dá)系統(tǒng)操作簡(jiǎn)單，僅需將線性模板或質(zhì)粒混勻，目標(biāo)蛋白在數(shù)小時(shí)內(nèi)即可表達(dá)出來(lái)。不需要轉(zhuǎn)化、克隆篩選和細(xì)胞裂解，避免了包涵體的形成。同時(shí)，避免了產(chǎn)物純化過(guò)程中目標(biāo)蛋白的損失。
蛋白表達(dá)系統(tǒng)一次實(shí)驗(yàn)可對(duì)多個(gè)樣品進(jìn)行操作，最小的反應(yīng)體系是12 μl，表達(dá)出來(lái)的蛋白濃度能達(dá)到1μg/μL，反應(yīng)體系可等比例擴(kuò)大。反應(yīng)系統(tǒng)里添加了多種大腸桿菌稀有密碼子，去除了密碼子偏好的問(wèn)題，并且表達(dá)的蛋白可正常折疊。
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